AVALIAÇÃO DA METILAÇÃO NA REGIÃO DA AMIGDALA CEREBRAL DE Rattus norvegicus EXPERIMENTALMENTE INFECTADO POR DUAS CEPAS DISTINTAS DE Toxoplasma gondii (ME49 E VEG)
GIULIO DE LOS SANTOS FORTUNA¹, LARIANE BARBOSA MONTEIRO¹, PEDRO PAULO CHIEFFI¹, ERICO SILVA TIAGO¹, LUCIANA REGINA MEIRELES¹, SERGIO VIEIRA DOS SANTOS ¹
1. FCMSCSP - Faculdade de Ciências Médicas da Santa Casa de São Paulo, 2. IMT/SP - Instituto de Medicina Tropical de São Paulo - Laboratório de Protozoologia
sergio.bio@usp.br

Toxoplasma gondii é conhecido por induzir alterações comportamentais específicas em seus hospedeiros intermediários, aumentando a chance de sua transmissão para o hospedeiro definitivo (felinos). A alteração que chama mais a atenção dos pesquisadores é o fenômeno de atração fatal, na qual a aversão natural dos roedores pelo cheiro de gatos é substituída pela atração. Estudos mostram que, por meio da hipometilação de certos genes-chave, Toxoplasma é capaz de reprogramar a maquinaria epigenética do cérebro de forma que o odor do predador ativa circuitos da amígdala medial póstero-dorsal, responsável ​​pelo comportamento de atração, e não aciona a amígdala póstero-ventral, responsável pela aversão. Porém, não se sabe se cepas diferentes de T. gondii apresentam mecanismos idênticos de manipulação. No presente estudo avaliou-se diferenças na metilação do gene responsável pela produção de Arginina-Vasopressina na região da amígdala de R. norvegicus infectados por cepas distintas de T. gondii . Foram utilizados quinze animais, divididos em três grupos com cinco animais cada: Controle sem infecção, G-ME49 e G-VEG – infectados com dez cistos de T. gondii das cepas ME-49 (tipo II) e VEG (tipo III), respectivamente. Após dois meses de infecção, procedeu-se a eutanásia dos animais com imediata cerebrotomia; em seguida, as amostras foram seccionadas em Matriz de 2 mm para cérebro de rato. A região da amígdala (Bregma -2,00 a -4,00, Interaural 6,24 a 5,76) foi microdissecada usando pipetas de vidro Pasteur autoclavadas e transferida para microtubo contendo 250 µL de tampão de lise. A extração do DNA total foi feita utilizando kit de extração (DNeasy Blood&Tissue) da QIAGEN. Após extração, o DNA foi digerido com enzima de restrição sensível à metilação: HpaII da PROMEGA (R6311), que cliva CCGG não metilado; e BsH1236I da Thermo Scientific (ER0921), que cliva CGCG não metilado. Após tratamento, foi efetuada eletroforese em gel de agarose a 1%. Os resultados mostraram que o DNA dos animais do grupo infectado com a cepa ME49 e tratados com ambas as enzimas apresentaram diminuição da intensidade das bandas em comparação ao DNA não tratado, o que não foi observado no DNA dos ratos controle e nos infectados pela cepa VEG. Pode-se inferir, portanto, hipometilação da região da amigdala apenas pela infecção da cepa ME49 de Toxoplasma gondii , o que indica influência da cepa do parasita quanto ao potencial de alteração comportamental do hospedeiro infectado.