AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIANGIOGÊNICA DA PROTEÍNA RECOMBINANTE P21 DE TRYPANOSOMA CRUZI E SEU POTENCIAL IMPACTO NA CARDIOMIOPATIA CHAGÁSICA CRÔNICA
SAMUEL COTA TEIXEIRA ¹, DAIANA SILVA LOPES¹, SARAH NATALIE CIRILO GIMENES¹, THAISE LARA TEIXEIRA¹, MARCELO SANTOS DA SILVA¹, REBECCA TAVARES E SILVA BRÍGIDO¹, FELIPE ANDRÉS CORDERO DA LUZ¹, ALINE ALVES DA SILVA¹, MAKSWELL ALMEIDA SILVA¹, PILAR VERAS FLORENTINO¹, PAULA CRISTINA BRÍGIDO TAVARES¹, MARLUS ALVES DOS SANTOS¹, VERIDIANA DE MELO RODRIGUES ÁVILA¹, MARCELO JOSÉ BARBOSA SILVA¹, MARIA CAROLINA ELIAS¹, RENATO ARRUDA MORTARA¹, CLAUDIO VIEIRA DA SILVA¹
1. UFU - Universidade Federal de Uberlândia, 2. IBU - Instituto Butantan , 3. UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo
samuctx@gmail.com

A Doença de Chagas, causada pelo parasito Trypanosoma cruzi , é uma importante causa da Cardiomiopatia Chagásica Crônica (CCC). A prospecção de agentes terapêuticos contra a CCC é o maior desafio. Neste cenário, a proteína recombinante P21 (rP21) de T. cruzi se encontra envolvida na invasão da célula hospedeira e na progressão de processos inflamatórios crônicos, o que a torna um novo potencial alvo terapêutico. Este trabalho teve como objetivo verificar o impacto da rP21 na formação de vasos sanguíneos in vitro e investigar a atividade antiangiogênica desempenhada pela rP21. A viabilidade e adesão de células tEnd tratadas com diferentes concentrações de rP21 ou extrato bacteriano foi avaliada por MTT (3-(4,5-dimetitiazol-2-il)-2,5-difenil-2H-tetrazólio) e a inibição da angiogênese foi verificada por ensaios da formação de vasos em Matrigel. Para analisar a atividade proteolítica da rP21 em componentes da matriz extracelular, fibrinogênio, matrigel e fibronectina foram incubados com rP21 ou não. A digestão dos substratos foi analisada por SDS-PAGE. O acúmulo e distribuição de F-actina foi determinado por marcação com faloidina e análise no software ImageJ. Para análise da expressão gênica, células tEnd foram incubadas com rP21 e o RNA total foi extraído usando o Kit de purificação RiboZol™ Plus (Amaresco) e o cDNA foi sintetizado por meio do Kit de Transcrição Reversa (Applied Biosystems). Observamos que a rP21 não alterou a viabilidade celular e adesão, entretanto promoveu a inibição da formação de vasos. Além disso, os ensaios de formação de vasos demonstraram que a inibição da angiogênese foi dependente da interação entre o receptor CXCR4 e rP21. Além disso, observamos que a rP21 promoveu um aumento nos níveis de F-actina e modulação da expressão de genes relacionados a angiogênese e ao citoesqueleto de actina. Entretanto, a rP21 não demonstrou atividade significativa nos componentes da matriz extracelular. Assim, a atividade antiangiogênica da rP21 pode ser devido à uma cascata de eventos disparados pela interação CXCR4-rP21. Por fim, concluímos que a inibição da angiogênese pela rP21 depende de sua ligação ao CXCR4 e da modulação da expressão de moléculas relacionadas à processos angiogênicos e ao citoesqueleto de actina.