PADRONIZAÇÃO DE TÉCNICA ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO PARA CAPTURA DE ANTICORPOS IGM PARA OS VÍRUS CHIKUNGUNYA E MAYARO |
O vírus chikungunya (VCHIK) , foi isolado pela primeira vez na Tanzânia em 1952 durante um surto atribuído ao VDEN, no Brasil foi observado o aparecimento de casos importados em junho de 2014, já o vírus Mayaro (VMAY), foi isolado em 1954 de trabalhadores rurais em Trinidad, após isso, foi isolado na área do Rio Guamá estado do Pará-Brasil. Ambos são pertencentes a família Togaviridae e ao gênero Alfhavirus . Foi realizada a padronização e validação da técnica de ELISA IgM concomitantemente para os VCHIK e VMAY utilizando anticorpo policlonal específico produzido em camundongos e anticorpo anti-mouse conjugado à enzima peroxidase, para a definição das diluições de cada etapa do ensaio a fim de se determinar a Densidade Óptica (DO) ideal dos controles que garanta a sensibilidade e especificidade esperada para o VCHIK. Foram definidas as diluições ideais dos insumos da técnica de ELISA IgM (anti-IgM humana/ conjugado anti-mouse e antígeno VCHIK /VMAY), utilizando como referência um painel controle composto de amostras sabidamente positivas, negativas e no cut-off, num total de 44 amostras previamente selecionadas da soroteca da SAARB/IEC, e também foram realizados testes espelhos para a verificação da reprodutibilidade do teste. Os dados obtidos foram analisados no programa BioEstat 5.0, para a comparação de resultados de sensibilidade e especificidade, onde se obteve o valor de sensibilidade e especificidade de 100% para o VMAY e de 100% e 96,46%, respectivamente, para o VCHIK, com o protocolo em estudo. Tal metodologia demonstra, então, ser bastante sensível e especifica para ser adotada pelos Laboratórios de Referência Nacional, com o intuito de se reduzir gastos com os insumos laboratoriais (por serem de fácil aquisição no mercado brasileiro) e tornar o exame menos trabalhoso, pelo fato de poderem ser feitos VMAY e VCHIK concomitantemente. |