DETECÇÃO FENOTÍPICA DE ESCHERICHIA COLI ISOLADAS DE TANQUE DE EXPANSÃO DE LEITE BOVINO PRODUTORA DE BIOFILME EM PLACA DE POLIESTIRENO
SAMEA FERNANDES JOAQUIM ¹, SIMONY TREVIZAN GUERRA¹, FELIPE DE FREITAS GUIMARÃES¹, FELIPE MORALES DALANEZI¹, BRUNA CHUROCOF LOPES¹, SIMONE BALDINI LUCHEIS¹, MÁRCIO GARCIA RIBEIRO¹, VERA LÚCIA MORES RALL¹, RODRIGO TAVANELLI HERNANDES¹, JOSÉ CARLOS DE FIGUEIREDO PANTOJA¹, DOMINGOS DA SILVA LEITE¹, HELIO LANGONI¹
1. UNESP - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", 2. APTA - Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios, 3. UNICAMP - Universidade Estadual de Campinas
simony.guerra@gmail.com

Biofilmes são um sério problema dentro da indústria alimentícia, particularmente em laticínios, pois dificultam a higienização de equipamentos devido à maior resistência a desinfetantes, além de serem uma fonte de contaminação constante, pois micro-organismos podem ser liberados gradativamente. Grande parte da contaminação do leite após a pasteurização ou esterilização está relacionada com a formação de biofilmes e há evidências que esses podem levar ao aumento da resistência a antimicrobianos. O objetivo do presente trabalho foi a detecção fenotípica de Escherichia coli produtora de biofilme em placa de poliestireno e caracteriza-se como um estudo transversal. Foram utilizadas 28 cepas de E. coli isoladas de leite de tanques de expansão de nove propriedades (6 no Estado de Minas Gerais e 3 em São Paulo). Inicialmente as amostras foram cultivadas em meio McConkey e as colônias suspeitas foram reisoladas e submetidas as seguintes provas bioquímicas: EPM, MILi e citrato de Simmons (EPM: produção gás/glicose, produção de ácido sulfídrico, hidrólise da uréia e desaminação do L-triptofano; MILi: motilidade, produção de indol e descaboxilação da lisina). Após a confirmação da espécie bacteriana, as colônias foram reisoladas no meio Luria Bertani e adequadas para escala 0,5 de McFarland (10 ⁸ UFC) com auxílio de turbidímetro. Foram pipetados 200 µL de cada estirpe em triplicata em placa de poliestireno de fundo reto, mantendo-se a 25ºC por 48 horas. A seguir, a placa foi lavada três vezes, com solução salina tamponada (pH 7,4), secagem à temperatura ambiente e corada com cristal violeta 1%, por 15 minutos. Após três lavagens com água destilada, e secagem a temperatura ambiente e 200 μl de álcool acético glacial foi adicionado, para desprendimento e homogeneização do biofilme. Após 15 minutos, realizou-se a leitura da placa em leitor de ELISA a 540 nm. A cepa EAEC 042 foi utilizada como controle positivo e o meio TSB (caldo triptona soja) como controle negativo. O ponto de corte foi estabelecido a partir da média da triplicata de controle negativo acrescido do desvio padrão do controle negativo. Dos 28 isolados, 19 foram classificados como produtores de biofilme (67,86%). Os resultados desse estudo evidenciam a presença de cepas de E. coli produtoras de biofilme no leite dos tanques de expansão avaliados e alertam para possíveis problemas em laticínios.  Agradecimentos: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Processos 2015/19688-8 e 2017/07246-6).