DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA DOENÇA DE CHAGAS CRÔNICA EM COORTE DE PACIENTES ATENDIDOS NO PROCAPE/UPE
THAYSE DO ESPÍRITO SANTO PROTÁSIO DA SILVA 1,3,4, SILVIA MARINHO ALVES1,3,4, GLORIA MELO1,3,4, WILSON OLIVEIRA JR 1,3,4, CRISTINA CARRAZZONE1,3,4, OTACÍLIO DA CRUZ MOREIRA 1,3,4, CONSTANÇA BRITTO 1,3,4, ANGELICA MARTINS BATISTA 1,3,4, JOSELI LANNES VIEIRA 1,3,4
1. IOC - Instituto Oswaldo Cruz , 2. PROCAPE/UPE - Ambulatório de Doença de Chagas e Insuficiência Cardíaca do Pronto Socorro Cardiológico de Pernambuco , 3. LBI - Laboratório de Biologia das Interações , 4. LABIMDOE - Laboratório de Biologia Molecular de Doenças Endêmicas
thayseprotasio@gmail.com

A doença de Chagas (DC), é uma endemia negligenciada que afeta cerca de 6-7 milhões de pessoas no mundo inteiro, principalmente na América Latina. A DC é causada pelo protozoário flagelado parasito Trypanosoma cruzi e caracteriza-se por possuir duas fases distintas: a fase aguda, com parasitemia patente, e a fase crônica, com parasitemia baixa e intermitente. Métodos moleculares, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), são úteis na detecção do DNA do parasito, revelando a sua presença recente. A PCR convencional pode ser utilizada no diagnóstico de pacientes crônicos da DC e para identificar casos de falha terapêutica.  Objetivamos realizar o diagnóstico molecular em um grupo de portadores de DC crônica (sorologia positiva), caracterizados clinicamente e demograficamente, nascidos e residentes no Estado de Pernambuco, e atendidos no “Ambulatório de doença de Chagas e Insuficiência Cardíaca do Pronto Socorro Cardiológico de Pernambuco” (PROCAPE/ Universidade de Pernambuco). Os pacientes foram classificados clinicamente nas formas indeterminada, cardíaca, digestiva e cárdio/digestiva. Foi realizada uma coleta de sangue periférico em tubo contendo EDTA. Guanidina-EDTA foi adicionada à amostra de sangue (v/v), seguido de fervura por 1 min e isolamento de DNA por kit (High Pure PCR Template Preparation Kit, Roche). Para a amplificação do kDNA utilizou-se o sistema Platinum TM Taq (Invitrogen), os oligonucleotídeos 121 (5’AAATAATGTACGGG(T/G)GAGATGCATGA3’) e 122 (5’GGTTCGATTGGGGTTGGTGA ATATA3’), como estabelecido por Morillo e colaboradores. Controles negativos foram usados para excluir possível contaminação da reação. O produto amplificado (330 pb) correspondente ao fragmento de kDNA esperado foi visualizado em gel de agarose 1,5%. Nossos dados preliminares, com o teste de 442 amostras em um grupo de 666 portadores da DC, mostram que 91/442 (20,6%) são positivos para a presença de DNA do T. cruzi. Dados da literatura apontam grande variabilidade percentual para o diagnóstico molecular em estudos com portadores crônicos da DC, estando o percentual encontrado em nosso estudo compatível com esta variação. Uma vez confirmado o diagnóstico molecular, temos como perspectiva a determinação da carga parasitária e caracterização genotípica do parasito, assim como o cruzamento com os dados clínicos, visando contribuir para o entendimento do papel do parasito no desfecho das formas clínicas da DC crônica.



Palavras-chaves:  Diagnóstico Molecular, Doença de Chagas , Reação em Cadeia da Polimerase, Trypanosoma cruzi