IDENTIFICAÇÃO DA PROTEÍNA APA SECRETADA POR MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS COMO NOVO BIOMARCADOR FECAL PARA A DOENÇA DE JOHNE EM BOVINO
GILIANE DA SILVA DE SOUZA CABRAL¹, ANA BARBARA F. RODRIGUEZ¹, MARIA ISABEL ROMANO¹, EFRANCI SELIPRANDY RIBEIRO¹, ANDERSON CARDOZO DA COSTA¹, WALTER M. R. OELEMANN¹, DAVID GITIRANA DA ROCHA¹, WILMAR DIAS DA SILVA¹, ELENA B. LASUNSKAIA¹
1. UENF - LABORATÓRIO DE BIOLOGIA DO RECONHECER, UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE, 2. INTA - INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA , CICV y A INTA- CASTELAR, 3. UFRJ - INSTITUTO DE MICROBIOLOGIA PAULO DE GOES, UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO, 4. INSTITUTO BUTANTAN - LABORATÓRIO DE IMUNOQUÍMICA, INSTITUTO BUTANTAN, 5. UENF - LABORATÓRIO DE MORFOLOGIA E PATOLOGIA ANIMAL, UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE
gigiuenf@hotmail.com

A Paratuberculose (PTB) ou doença de Jonhe é uma infecção intestinal crônica de ruminantes, causada pelo Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). É caracterizada pela síndrome de má absorção, onde os animais infectados apresentam sinais de diarreia, perda de peso e eventualmente morte.  A doença tem grande importância por causar prejuízos econômicos na pecuária e também há relatos de possível associação de infecção por MAP na doença de Crohn em humanos. No entanto, a importância da doença é subestimada no Brasil, devido à falta de métodos de diagnóstico rápidos, baratos e de alta sensibilidade e especificidade. Novas abordagens para imunodiagnóstico baseadas na detecção e identificação de antígenos de bactéria em fezes podem ser úteis para diagnóstico. A eliminação de MAP nas fezes começa nos estágios iniciais da infecção e aumenta ao longo da doença, sugerindo que antígenos secretados pelas micobactérias poderiam ser excretados com as fezes. Anteriormente, demonstramos que o antígeno rico em alanina e prolina (APA), um importante antígeno secretor do MAP, pode ser detectado no intestino de animais com PTB utilizando anticorpo monoclonal específico (mAb). O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença da proteína APA em níveis consistentemente detectáveis ​​em fezes de bovinos com PTB. As fezes obtidas de vacas: 1) com doença de Johne confirmada por exames laboratoriais; 2) suspeitas em PTB com evidência de infecção baseada na soropositividade, e 3) vacas de controle livre de PTB, foram imunoprecipitadas pelo mAb anti-APA e analisadas por immunoblot, testadas por ELISA sanduíche e submetidas a métodos bacteriológicos para isolamento de MAP. A proteína APA isolada de fezes apresentou uma banda de 60/70 kDa em todas as amostras obtidas dos animais com doença confirmada, em animais assintomáticos soropositivos, mas não em amostras de animais controle. Adicionalmente, o antígeno foi detectado nas fezes de animais com doença de Johne pelo ELISA anti-APA, apresentando boa correlação com resultados do método bacteriológico (padrão ouro no diagnóstico da doença ativa).  Este estudo sugere fortemente que o antígeno APA é um potencial biomarcador fecal da doença de Johne em bovinos que poderia servir para o imunodiagnóstico da doença.