EXPRESSÃO DE microRNA EM MACRÓFAGOS HUMANOS IN VITRO INFECTADOS POR Leishmania (Leishmania) infantum
EDUARDO MILTON RAMOS SANCHEZ ¹, LUIZA CAMPOS REIS¹, MARINA ASSIS SOUZA¹, SANDRA M. MUXEL¹, RICARDO A. ZAMPIERI¹, LUCILE MARIA FLOETER-WINTER¹, AUDUN HELGE NERLAND¹, HIRO GOTO¹
1. IMTSP/USP - Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, Universidade de São Paulo, 2. FMUSP/USP - Departamento de Medicina Preventiva, Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo, 3. IB/USP - Departamento de Fisiologia, Instituto de Biociências, Universidade de São Paulo, 4. UIB - Department of Clinical Science, University of Bergen
eduardors22@hotmail.com

Introdução: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada por Leishmania (Leishmania) infantum que, na sua forma ativa, evolui com febre, hepatoesplenomegalia e pancitopenia. O desenvolvimento e a progressão da doença podem estar relacionados, em parte, a mudanças no controle da expressão gênica relacionadas a respostas imunes e inflamatórias. Em estudo prévio do nosso grupo em LV canina, observamos dados sugestivos de regulação pós-transcricional por microRNAs (miRNAs) no estudo de fator que influencia o parasitismo. Observamos aumento da expressão de  mRNA do fator de crescimento insulina símile I (IGF-I) no fígado, mas seu nível sérico diminuído. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar mudanças na expressão de miRNAs em células infectadas por L. (L.) infantum para avaliar o significado biológico dessas mudanças. Métodos: Linhagem de monócitos humanos THP-1 (5x10 ⁵ ) foi infectada com promastigotas de L. (L.) infantum na fase estacionária (8 parasitos/célula) e mantida por 6 e 24 horas de incubação. Em seguida, as células foram coletadas para isolamento total de RNA utilizando o kit mirVANA. Após o isolamento do RNA, o RNA total foi transcrito reversamente e utilizado para avaliar os níveis de miRNAs utilizando o kit I nflammatory Response and Autoimmunity miScript miRNA PCR Array. A quantificação relativa dos miRNAs foi avaliada usando miScript miRNA PCR Array Data Analysis. A predição computacional dos alvos foi realizada com o DIANA-miRpath 3.0 server (TargetScan algorithm) e miEAA (miRWalk). Resultados: I dentificamos 11 miRNAs que foram regulados positivamente com 24 horas de infecção. Destes 11 miRNAs, 4 miRNAs estavam negativamente regulados com 6 horas de infecção enquanto outros já estavam positivamente regulados neste tempo. Todos esses miRNAs possuem alvos diferentes previstos nas vias do TGF-β, TLR4, IGF-I, HIF1, além de um total de 48 possíveis interações com diferentes vias sugerindo uma modulação da expressão gênica pela infecção por Leishmania . Conclusão: Estes resultados sugerem que diferentes miRNAs são expressos ou regulados  dinamicamente pela infecção por L. infantum . Outros experimentos de validação serão realizados para validar o seu papel no processo patológico.