AVALIAÇÃO IN VITRO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E CITOTÓXICA DE FRAÇÕES ÁCIDAS DO VENENO BRUTO DE BOTHROPS MOOJENI
ANDRÉ FELIPE SOUSA SANTOS1, ANTONIO JUNIO FEITOSA DA SILVA1, FLÁVIO AUGUSTO DE SOUZA OLIVEIRA1, BRUNO GILDO DALLA VECCHIA MORALES1, JORGE JAVIER ALFONSO RUIZ DÍAZ1, ANDERSON MACIEL DE LIMA1, CAROLINA BIONI GARCIA TELES1, ANDREIMAR MARTINS SOARES1, CHRISTIAN KUEHN1
1. UNIR - Fundação Universidade Federal de Rondônia , 2. FIOCRUZ - Fundação Oswaldo Cruz Rondônia
Christian.collins@unir.br

Venenos ofídicos possuem ampla gama de constituintes, com destaque para os componentes proteicos. Este potencial molecular é capaz de proporcionar novas ferramentas ao enfrentamento de infecções por bactérias multirresistentes. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar, in vitro , a ação de frações ácidas do veneno bruto de Bothrops moojeni (VBM) sobre cepas ATCC (American Type Culture Collection) e MRSA (patogênica multirresistente) de Staphylococcus aureus , por meio do método de microdiluição em caldo, bem como avaliar o efeito citotóxico sobre linhagem celular HepG2. Amostra liofilizada de veneno bruto foi pesada, solubilizada e submetida ao fracionamento em cromatografia de troca iônica (HPLC GE ® Life Sciences, USA) para obtenção do grupo de frações ácidas (F AC ), que passou por dosagem proteica ( DC Protein Assay ® ) e análise eletroforética em SDS-PAGE 12,5%. Inóculo bacteriano preparado segundo o método de crescimento (CLSI, 2012). No método de microdiluição foi adotado Imipenem 500 μg/mL como controle positivo (morte bacteriana) e caldo BHI, controle negativo. Ensaios em duplicata e microplacas incubadas a 37ºC por até 24 horas. Leitura através de inspeção visual e confirmação por turbidimetria (450 nm). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi considerada a menor concentração de F AC capaz de inibir completamente o crescimento bacteriano. One-Way Anova e Pós-teste de Tukey foram aplicados na análise estatística das médias de absorbância. A avaliação de citotoxicidade sobre HepG2 foi realizada em triplicata, com adição de MTT 5mg/mL e posterior leitura à 570 nm. Resultados expressos em concentração citotóxica para 50% das células (CC 50 ). Em SDS-PAGE 12,5%, F AC formou bandas notáveis de 15 e 60 kDa. A CIM de F AC ativa contra S. aureus ATCC 25923 e MRSA, ficou definida em 7.8 μg/mL. Sobre HepG2, foi possível mensurar uma CC 50 de 12.85 µg/mL e viabilidade celular de 100% em 3.12 μg/mL. Estes resultados permitem inferir que F AC exerce ação antimicrobiana total em concentração próxima daquela com nenhuma citotoxicidade sobre células do fígado humano. Estudos anteriores indicam que esta ação pode estar relacionada à LAAOs e PLA 2 (STÁBELI et al., 2007; SILVEIRA et al., 2013). Pode-se considerar também uma possível ação sinérgica destas macromoléculas. Maiores estudos com F AC VBM e seus componentes devem ser realizados, visando sua utilização como novas drogas de uso clínico.



Palavras-chaves:  Bothrops moojeni, Resistência Antimicrobiana, Veneno