AVALIAÇÃO IN VITRO DE FRAÇÕES DO VENENO BRUTO DE BOTHROPS ATROX SOBRE STAPHYLOCOCCUS AUREUS ATCC E MRSA |
Venenos de serpentes possuem ampla gama de constituintes com destaque para os componentes proteicos. Tal característica pode proporcionar o desenvolvimento de novas estratégias no combate às infecções por bactérias multirresistentes. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar, in vitro , a ação de frações do veneno bruto de Bothrops atrox (VBAT) sobre cepas ATCC (American Type Culture Collection) e MRSA (patogênica multirresistente) de Staphylococcus aureus , por meio do método de poço-difusão em ágar. Amostra de veneno bruto armazenada seca à vácuo foi pesada, solubilizada e submetida ao fracionamento por gel-filtração (HPLC GE ® Life Sciences, USA). As frações obtidas passaram por quantificação do teor proteico ( DC Protein Assay ® ), análise em SDS-PAGE 12,5% e foram avaliadas frente às cepas bacterianas na difusão em meio ágar. Inóculo bacteriano preparado segundo o método de crescimento (CLSI, 2012). Imipenem 500 μg/mL como controle positivo e PBS 1X, controle negativo. Diâmetros dos halos de inibição do crescimento medidos com o auxílio de halômetro. A gel-filtração de VBAT resultou em 8 frações (F) eluídas. SDS-PAGE 12,5% revelou que F1 contém proteínas com aproximadamente 55, 36 e 30 kDa. Na avaliação em poço-difusão, F1 demonstrou formação de halo sobre S. aureus ATCC 25923 e MRSA. As frações restantes não formaram halo de inibição do crescimento. PBS 1X não formou halo e Imipenem 500 μg/mL, halo > 30 mm. A repetição do teste em triplicata com F1, revelou média do halo de 20.67 mm sobre S. aureus ATCC 25923 e 22 mm sobre MRSA. Em gel-filtração, moléculas maiores eluem juntas ao primeiro pico do cromatograma; moléculas menores, juntas ao último pico. O tamanho real das moléculas reflete o seu peso molecular (KAZAKEVICH; LOBRUTTO, 2006). A ordem de eluição e o SDS-PAGE 12,5% indicaram que F1 contém proteínas de maior peso molecular e concentração proteica mais elevada. O padrão eletroforético das frações foi compatível aos de componentes isolados em outros estudos com veneno de B. atrox . Os resultados obtidos demonstram que a fração F1 VBAT apresentou ação antimicrobiana sobre as cepas de S. aureus , ATCC e MRSA. Tal atividade pode estar relacionada à presença de componentes proteicos com atividade enzimática, atuando de forma isolada ou sinérgica. Nesse contexto, novos estudos devem ser realizados com o intuito de isolamento, purificação e caracterização funcional dos mesmos. |