TIPAGEM DE ISOLADOS DA ESPÉCIE Trichosporon asahii POR SEQUENCIAMENTO MULTILOCUS
LETICIA BONATO SOUZA SANTOS ¹, LUMENA PEREIRA MACHADO SIQUEIRA¹, GILDA MARIA BARBARO DEL NEGRO¹, GABRIEL NAVES FELIX¹, ADRIANA LOPES MOTTA¹, JOÃO NOBREGA DE ALMEIDA JUNIOR¹
1. LIM53 HC-FMUSP - Laboratório de Micologia Médica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, 2. DLC HC-FMUSP - Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo
bonato.leticia@hotmail.com

Nas últimas décadas, observou-se um número crescente de relatos de tricosporonose invasiva em ambientes hospitalares, devido ao aumento da população suscetível e a melhoria dos métodos diagnósticos. Leveduras do gênero Trichosporon, depois de Candida, são as mais relacionadas à infecção fúngica invasiva em pacientes hematológicos, sendo Trichosporon asahii responsável por 90% dos casos. A identificação de espécies de Trichosporon é realizada através do sequenciamento da região IGS do RNA ribossomal, técnica considerada padrão-ouro. Através do estudo dos polimorfismos da região IGS, diversos genótipos de T. asahii têm sido descritos, entretanto sem relação com a distribuição geográfica, perfil de suscetibilidade aos antifúngicos ou patogenicidade. O presente estudo teve como objetivo padronizar um método de análise por sequenciamento multilocus ( multilocus sequencing typing - MLST) para a espécie T. asahii , definindo novos loci para a diferenciação dos genótipos. Foram analisados isolados clínicos e cepas de referência de T. asahii provenientes de diferentes origens e genótipos. Para a escolha dos loci e confecção dos primers , foram analisados os genomas de duas cepas de referência de T. asahii (CBS2479 e CBS8904) disponíveis no GenBank e, após alinhamento das sequencias, foram escolhidos os loci que apresentaram maior variabilidade genética entre as duas cepas. Trinta e cinco pares de primers foram delineados e, após análise de desempenho, foram selecionados os 8  loci de maior poder discriminatório, definido pela relação entre o número de genótipos e o número de sítios polimórficos apresentados. Os loci selecionados para a análise multilocus foram PHCP, TOP1, βTub, ATP7B, RPB2, NADPH, CDC19 e CAP59, que apresentaram maior poder discriminatório que a região IGS. As análises realizadas até o momento, com 18 cepas de T. asahii e sequenciamento dos 8 loci , mostram uma distribuição filogenética divergente pela análise multilocus, com isolados de mesmo genótipo IGS locados em nodos filogenéticos distintos. Estes resultados sugerem uma possível reclassificação genotípica, baseada em esquema de MLST, demonstrando que poderá ser um método de referência para diferenciar as variedades genéticas de T. asahii . Em análises futuras essas informações poderão ser correlacionadas à eventos epidemiológicos ou a fenômenos biológicos específicos.