AVALIAÇÃO DE UM SISTEMA BASEADO EM LAMP (AMPLIFICAÇÃO ISOTÉRMICA EM ALÇA) NA DETECÇÃO DO ALVO MOLECULAR IS6110 PARA DIAGNÓSTICO DA TUBERCULOSE
ROMÁRIO MARTINS ARAÚJO ¹, ROSANA DE ALBUQUERQUE MONTENEGRO¹, ALINE DOS SANTOS PEIXOTO¹, MARCELA PEREIRA SALAZAR¹, LEONARDO DE AQUINO LINHARES¹, FABIANA CRISTINA FULCO SANTOS¹, RAYSSA MARIA PASTICK JARES DA COSTA¹, ANDREZA SOUZA DO NASCIMENTO¹, ILYANA OLIVEIRA COUTINHO¹, LUANNA DE ÂNGELIS CORREIA DE SOUSA¹, JOÃO PAULO DE LUCENA LAET¹, KESSIA KELLY BATISTA DA SILVA¹, DANYELE COSTA DE MELLO¹, MARIA ALMERICE LOPES DA SILVA¹, LÍLIAN MARIA LAPA MONTENEGRO PIMENTEL¹, HAIANA CHARIFKER SCHINDLER¹, FÁBIO LOPES DE MELO¹
1. IAM-FIOCRUZ/PE - Instituto Aggeu Magalhães – Fundação Oswaldo Cruz/Pernambuco
araujo.rmartins@gmail.com

A tuberculose (TB) é uma doença infecto-contagiosa de evolução crônica que possui como agente etiológico o Mycobacterium tuberculosis (MTB) . Seu genoma apresenta 4.411kb, sendo constituído por 3.924 regiões abertas de leitura. Parte do material genético é composto por elementos de inserção (IS), sendo o IS6110 o mais utilizado na prática clínica. A forma clínica da TB é caracterizada pelo acometimento dos pulmões, podendo atingir outros sítios anatômicos (TB extrapulmonar), ou, ainda, ocorrer de forma disseminada (TB miliar). O diagnóstico convencional da tuberculose é realizado através da análise das características clínicas-epidemiológicas, associada a exames de imagem, laboratoriais, moleculares e imunológicos. Entretanto, o diagnóstico das formas extrapulmonar e disseminada se torna dificultado devido à sintomatologia inespecífica e à baixa sensibilidade dos métodos convencionais. Diante disso, observa-se a necessidade de um teste com sensibilidade e especificidade mais elevados, de forma a evitar o tratamento inadequado. A técnica de Amplificação Isotérmica em Alça (LAMP) consiste na amplificação isotérmica do DNA alvo utilizando seis oligonucleotídeos diferentes, desenhados para amplificar oito regiões no gene alvo. É descrita como capaz de fornecer um diagnóstico rápido, acurado e de baixo custo. O método tem sido aplicado com sucesso na detecção e diagnóstico de vários micro-organismos patogênicos, apresentando alta eficácia. Esse trabalho busca avaliar um sistema baseado em LAMP na detecção específica do alvo IS6110 para o diagnóstico da tuberculose. O estudo foi realizado utilizando cepa de referência H37Rv para avaliação do desempenho do ensaio de LAMP. Com o intuito de avaliar limite de detcção da técnica, foram utilizadas três curvas de diluição de DNA, todas variando de 10ng/μL a 1fg/μL. As curvas foram classificadas como: a) Curva de diluição em água; b) Curva de diluição em amostra de sangue; c) Curva de diluição em amostra de urina. Os resultados referentes a curva de diluição em água (a) indicaram que o limite de detecção da técnica de LAMP foi de 10fg/ µL. Em relação às curva de diluição em amostra de sangue (b) e em amostra de urina (c), também foi encontrado um limite de detecção de 10fg/ µL. Por fim, Os resultados obtidos sugerem que a técnica de LAMP demonstra um elevado potencial no diagnóstico da tuberculose, apresentando elevada sensibilidade, sendo capaz de detectar o equivalente ao genoma de duas cepas de referência de H37Rv .