VIABILIDADE DE GAMETÓCITOS E OOCINETOS FRENTE A COMPOSTOS DO MALÁRIA BOX |
Os oocinetos são formas móveis do Plasmodium spp. oriundos dos gametócitos, sendo este último responsável por transmitir a doença ao vetor da malária, o mosquito Anopheles spp. Os oocinetos migram até a parede do intestino médio do mosquito transformando-se em oocistos, e por fim, esporozoítos, responsáveis pela transmissão da doença. Assim, estudar compostos que possam inviabilizar a conversão dos gametócitos em oocinetos é uma ferramenta que pode ser utilizada para gerar o bloqueio de transmissão, estratégia utilizada para o controle da malária em países endêmicos. Com isso, este trabalho objetiva-se em produzir oocinetos in vitro e investigar a eficácia de drogas contra gametócitos e na conversão gametócito - oocineto de P. berghei . Os compostos utilizados para este fim são provenientes da organização Medicines for Malaria Venture (MMV), que possui uma seleção de 400 compostos com possível ação antimalárica, o Malária Box. Após revisão bibliográfica de resultados com o P. falciparum , 8 compostos MMV foram selecionados, além do azul de metileno (AM), como droga controle, todos a 10 µM. Para verificar a viabilidade dos gametócitos frente aos compostos, foi utilizada a cepa P. berghei 820 cl1M1cl1, onde apenas gametócitos emitem fluorescência. Masculinos GFP e femininos RFP. Após 1, 3, 6, 12 e 24 horas a viabilidade dos gametócitos frente aos compostos foi analisada por citometria de fluxo. Para a produção de oocinetos, foi utilizada a cepa P. berghei GFP@Hsp70 onde todas as formas parasitárias emitem fluorescência. A cultura foi realizada utilizando o protocolo descrito anteriormente e após 24 horas os oocinetos foram contados em microscópio de fluorescência frente à adição prévia dos compostos ou não. Após análise estatística utilizando o teste Anova two way, todos os compostos testados, exceto o 5, apresentaram diminuição de gametócitos femininos e masculinos frente ao controle em diferentes tempos de exposição. Com a estabilização da cultura de oocinetos apresentando em média 200 oocinetos por µL/cultura, os compostos testados que apresentaram diminuição na conversão gametócito – oocineto após teste estatístico de Kruskal-Wallis foram 1, 3, 4, 6 e AM. Com os resultados apresentados, os compostos testados parecem ser fortes candidatos a drogas para bloqueio de transmissão, podendo ainda ser testados in vivo e com espécies como o P. vivax , de difícil cultivo e com grande importância epidemiológica no nosso país. |