AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E CAPACIDADE DE INIBIÇÃO DE BIOFILME DO PEPTÍDEO SINTÉTICO DERMASEPTINA H5 DE PHYLLOMEDUSA AZUREA
ANTONIO JUNIO FEITOSA DA SILVA ¹, ANDRÉ FELIPA SOUZA SANTOS¹, BRUNO GILDO DALLA VECCHIA MORALES¹, ALINE THAIS FERREIRA SANTANA¹, BRUNA DE OLIVEIRA COSTA¹, YGOR RIQUELME ANTUNES ¹, FLÁVIO AUGUSTO DE SOUZA OLIVEIRA¹, VALDECI NUNES DE OLIVEIRA¹, SUZANA MEIRA RIBEIRO¹, OCTÁVIO LUIZ FRANCO¹, LEONARDO DE AZEVEDO CALDERON¹, CHRISTIAN COLLINS KUEHN¹
1. UNIR - Fundação Universidade Federal de Rondônia , 2. FIOCRUZ - Fundação Oswaldo Cruz Rondônia , 3. UCDB - Universidade Católica Dom Bosco , 4. UFGD - Universidade Federal da Grande Dourados
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A pele de anuros são fontes de potenciais peptídeos que possuem atividades biológicas contra bactérias resistentes e formadoras de biofilme. Entre os peptídeos extraídos da pele de anuros, observa-se que a Dermaseptina H5 de Phyllomedusa azurea possui atividade antimicrobiana, podendo ser utilizada no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas no controle de infecções causada por bactérias multirresistentes. Dessa forma, o presente estudo tem por objetivo analisar a atividade antimicrobiana in vitro e avaliar a capacidade de inibição de formação de biofilme do peptídeo Dermaseptina H5 contra cepas de Escherichia coli ATCC ^® 25922 e carbapenemase positiva. A metodologia empregada para análise antimicrobiana foi determinada pela concentração inibitória mínima do crescimento bacteriano, onde foram utilizadas placas de 96 poços contendo diluição seriada do peptídeo de 800 a 1,2 µg/mL com volume de 100 µl. Em seguida, foram adicionados 100 µl de suspensão bacteriana (1,5x10 ⁸ UFC/ml). Como controle positivo foi utilizado o Imipenem 500 µg/ml. Em seguida a placa contendo triplica das amostras foram lidas em espectrofotômetro em absorbância de 500 nm. Para a concentração inibitória mínima de biofilme as bactérias foram crescidas em meio Muller Hinton por 18 h e diluídas em meio BM2 na concentração 1:100. Em seguida, foram adicionados 100 µl do peptídeo em concentrações que variavam de 64 a 1 µg/mL. Após a diluição do peptídeo foram acrescentados 100 µL da cultura bacteriana e incubado por 24 horas e posteriormente analisado em espectrofotômetro com comprimento de onda 600 nm. Em seguida, as bactérias foram coradas com cristal violeta a 0,01% por 20 min e posteriormente removidas com etanol 60% e analisadas em absorbância de 595 nm. Os resultados foram analisados através do Graphic Prisma ^® 7.0, onde foram verificadas que as concentrações inibitórias mínimas comparadas ao controle de morte celular para E. coli ATCC e multirresistentes foram respectivamente 12,5 e 6,25 µg/mL. Não houve inibição de células planctônicas em nenhuma das concentrações testadas, comparadas ao controle de crescimento. Em contra partida, houve significativa inibição de biofilme de E. coli ATCC nas concentrações 4 a 64 µg/mL. Com base nos resultados, o peptídeo Dermaseptina H5 caracteriza-se como molécula antimicrobiana, capaz de inibir a formação de biofilme formado por E. coli , mesmo em baixas concentrações, Estudos futuros como sinergismo podem potencializar os resultados obtidos.