DIAGNÓSTICO HISTOPATOLÓGICO E MOLECULAR DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA UTILIZANDO AMOSTRAS IMPREGNADAS EM GLICOL METACRILATO |
A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é uma doença negligenciada, seu diagnóstico é complexo e devido à falta de infraestrutura em áreas endêmicas laboratórios centrais dão suporte na elucidação dos casos. Neste contexto, o exame histopatológico tem grande importância, especialmente no diagnóstico diferencial. O glicol metacrilato (GMA) é uma alternativa à parafina para impregnação de tecidos, proporciona cortes mais finos, com menor quantidade de artefatos e por conta disso melhor resolução morfológica. A PCR tem sido cada vez mais utilizada para o diagnóstico e caracterização de espécies, empregando diferentes amostras clínicas e tipos de conservação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de amostras processadas com GMA para o diagnóstico histopatológico e molecular da LTA. Vinte e cinco amostras, oriundas de pacientes com suspeita clínica de LTA, foram processadas a frio para impregnação com GMA, submetidas a cortes extra-finos (3µm) e coradas por azul de toluidina e fucsina básica. Para o ensaio de PCR, foram incubados trinta e cinco cortes a 55ºC durante 12 horas em tampão TEN contendo NP-40 e proteinase K. O DNA foi extraído do sobrenadante e utilizado primers para amplificar a região do minicírculo do KDNA de Leishmania e β-globina humana. Em 16 pacientes foi observado processo granulomatoso compatível com LTA ao exame histopatológico. A PCR foi positiva em 21 pacientes. Dentre os 4 pacientes negativos na PCR, 3 apresentaram ensaio negativo para o gen β-globina. Adicionalmente, as imagens histopatológicas das amostras impregnadas com GMA demonstraram boa resolução das estruturas celulares e parasitos. O DNA extraído das amostras de GMA foi amplificável pela PCR para o gen de Leishmania e β-globina humana. Houve associação entre achados histopatológicos compatíveis com leishmaniose e a PCR (p <0,05). De acordo om o nosso conhecimento, este foi o primeiro estudo que empregou amostras impregnadas em GMA, para o diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar, através do exame histopatológico e PCR. Nossos resultados demonstraram que essas amostras permitiram uma melhor resolução no exame microscópico e detecção de DNA de Leishmania pela PCR. |