ANÁLISES IN VITRO E IN SILICO DO MECANISMO DE AÇÃO DA MORINA EM LEVEDURAS DO COMPLEXO CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS |
As micoses oportunísticas tornaram-se relevante problema de saúde pública, causando danos a grande parte da população mundial, muitas vezes comprometendo a qualidade e a expectativa de vida dessas pessoas. A criptococose é uma importante doença fúngica que tem como agente etiológico, leveduras pertencentes ao complexo Cryptococcus neoformans . A resistência dessas leveduras aos agentes antifúngicos tem aumentado ao longo dos anos, fazendo com que se busque diferentes terapias para a infecção. A simulação de docking molecular auxilia a busca destas novas terapias onde utiliza-se uma estrutura tridimensional de um complexo proteína-ligante simulada computacionalmente. Este trabalho objetivou avaliar o mecanismo de ação do flavonoide morina sobre leveduras do complexo C. neoformans bem como elucidar potenciais inibidores de enzimas importantes na membrana celular fúngica. Para alcançar os objetivos propostos primeiramente foi avaliada ação do composto sobre o ergosterol, e verificada a ação da morina sobre a membrana citoplasmática de C.neoformans ATCC 90112, e de C. gattii ATCC 24065 usando citometria de fluxo. Em seguida aplicamos o método de evolução diferencial guiada ( Guided differential evolution , GDE) implementado no programa Molegro Virtual Docker para obter a posição cristalográfica do ligante para a previsão da interação proteína-ligante. Os resultados obtidos mostraram que a morina foi capaz de reduzir cerca de 59,65% do ergosterol em concentração inibitória mínima (32 µg/mL) e a citometria de fluxo mostrou lesão de membrana em 45,5% da célula fúngica nesta mesma concentração. As simulações de re-docking foram feitas com a estrutura da Trealose-6-fosfato fosfatase de C. neoformans. Análise dos resultados de re-docking para a combinação de quatro algoritmos de busca, quatro funções scores e a presença de moléculas de água (um total de 32 protocolos diferentes de docking ) geraram um RMSD menor que 2 Å. Os seguintes parâmetros e suas combinações foram variados: raio da esfera docking, número de séries, número máximo de interações e tamanho da população máxima demonstrando interações de pontes de hidrogênio e van der walls com resíduos. Estes resultados mostraram que o composto age sobre a membrana celular das leveduras pertencentes ao complexo C. neoformans , e a trealose 6-fosfato fosfatase torna-se um alvo em potencial para elucidação do mecanismo de ação que envolve a membrana celular. |