Avaliação de Ensaio de PCR em Tempo Real para a Detecção de Mycobacterium tuberculosis resistente à Isoniazida
GRAZIELE BELLO¹, FRANCIELE MORAIS¹, JONAS WOLF¹, MIRELA GEHLEN¹, RICHARD STEINER SALVATO ¹, REGINA BARCELLOS¹, ELIS REGINA DALLA COSTA¹, MARIA LUCIA ROSSETTI¹
1. PPG BIOSAÚDE ULBRA - Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada à Saúde - Universidade Luterana do Brasil, 2. ULBRA - Universidade Luterana do Brasil, 3. PPG PNEUMO - UFRGS - Programa de Pós-Graduação de Ciências Pneumológicas da UFRGS, 4. UFRJ - Universidade Federal do Rio de Janeiro, 5. CDCT-RS - Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Rio Grande do Sul
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Dentre as doenças infecciosas, a tuberculose (TB) é considerada uma das mais prevalentes e com altas taxas de mortalidade. O panorama é ainda mais complicada pelo aumento das cepas de Mycobacterium tuberculosis resistente aos principais fármacos utilizados no tratamento anti-TB. O diagnóstico precoce e a identificação dos principais genes de resistência são considerados os fatores mais importantes para o controle da doença. O objetivo deste estudo foi padronizar e avaliar o uso da genotipagem por PCR em tempo real para identificar as principais mutações envolvidas na resistência à isoniazida - INH ( katG 315G/C e inhA -15 C/T). Para a realização da PCR em tempo real foram analisadas 55 amostras de DNA extraído de cultura de M. tuberculosis resistente à INH, previamente caracterizadas por sequenciamento. A concordância entre os testes (PCR em tempo real versus sequenciamento) foi, para o alvo katG , o índice Kappa de 0,89. A sensibilidade e especificidade foram 97 e 91%, respectivamente. Para inhA , o índice de Kappa foi de 0,91, a sensibilidade e especificidade foram 94 e 97%, respectivamente. A análise da curva ROC mostrou a área sob a curva (AUC) de 0,94 para katG e 0,96 para inhA (para ambas as avaliações, a AUC apresentou significância estatística de p<0,001). Concluiu-se que a genotipagem por PCR em tempo real é um bom método para identificar as principais mutações envolvidas com a  resistência à INH, assim como pode ser uma alternativa ao sequenciamento.