Caracterização bioquímica, funcional e molecular da α-fucosidase de Rhodnius prolixus |
A doença de Chagas é uma doença tropical negligenciada causada pelo protozoário Trypanossoma cruzi , sendo considerada endêmica no Brasil. Uma das formas de transmissão dessa doença é através das fezes e urinas contaminadas de triatomíneos. Os triatomíneos são insetos essencialmente hematófagos pertencentes a ordem Hemiptera, família Reduviidae e subfamília Triatominae. Uma das espécies de triatomíneos muito utilizadas para estudos é Rhodnius prolixus devido a sua fácil manutenção em laboratório e a sua importância na transmissão da doença de Chagas em países da região setentrional da América do Sul. Os triatomíneos possuem o tubo digestório dividido em segmentos com diferentes funções. Dentre as diferentes enzimas que atuam no compartimento intestinal, podemos destacar a α-fucosidase (EC 3.2.1.51) que é uma glicosídeo hidrolase da família 29 (GH29) responsável pela hidrólise de ligações glicosídicas em fucosídeos e glicoconjugados, podendo desempenhar um importante papel na digestão. Além disso, como parte do ciclo do parasita ocorre no tubo digestório do inseto, e T. cruzi possui uma extensa rede de glicoconjugados de membrana, essa enzima pode também estar envolvida na interação parasita-vetor. O gene de α-fucosidase está presente em todas as ordens de insetos e sua sequência de aminoácidos é semelhante em múltiplas espécies e conservada na subordem Heteroptera. O genoma de R. prolixus possui um único gene de α-fucosidase com um peptídeo sinal (SignalP 4.1 e Phobius) e 9 exons, codificando uma proteína de aproximadamente 55kDa, ponto isoelétrico 6,4 (compute pI/Mw), uma hélice transmembrana (Hmmtop), 8 O-glicosilações (NetOglyc) e 4 N-glicosilações (NetNglyc). Através da técnica de RNA de interferência obtivemos um silenciamento gênico de pelo menos 80% da expressão na glândula salivar, intestino médio anterior e intestino posterior, enquanto no intestino médio posterior não houve silenciamento. Pretendemos verificar a capacidade tripanolítica da α-fucosidase e observar os efeitos do seu silenciamento por RNAi, para compreender melhor sua importância no processo digestivo e sua modulação frente a interação do vetor com o parasito. |