PRODUÇÃO DE ADAMTS RECOMBINANTE DA GLÂNDULA SALIVAR DE RHODNIUS NEGLECTUS
SOFIA MARCELINO MARTINS SILVA 1, DÉBORAH BIANCA SANTOS MARTINS DÉBORAH MARTINS1, JAIME MARTINS DE SANTANA JAIME SANTANA1, CARLA NUNES DE ARAÚJO CARLA ARAÚJO1
1. UNB - Universidade de Brasília
Sofiamarcelinom@gmail.com

Os  triatomíneos  hematófagos  são  insetos  que  atuam  como  transmissores  do  Trypanosoma  cruzi,  um  protozoário  que  é  o  agente  etiológico  da  Doença  de  Chagas.  Rhodnius  neglectus  é  uma  espécie  de  triatomíneo  silvestre,  considerada  vetor  secundário  no  Brasil  Central.  A  saliva  dos  triatomíneos  contém  moléculas  bioativas  eficientes,  relacionadas  ao  hábito  de  alimentação  sanguínea,  que  ao  serem  inoculadas  pela  picada,  neutralizam  a  hemostase  e  modulam  reações  inflamatórias  e  as  respostas  imunológicas  de  seus  hospedeiros  vertebrados.  A  saliva  de  R.  neglectus  contém  proteases  e  já  foi  descrita  a  presença  de  uma  desintegrina  e  metaloproteinase  com  motivos  de  trombospondina  (ADAMTS).  As  ADAMTS  podem  desempenhar  um  papel  essencial  na  hematofagia,  influenciando,  sobretudo,  na  coagulação  sanguínea,  fibrinólise  e  no  sistema  calicreína-cininas.  O  objetivo  desse  trabalho  é  realizar  o  estudo  da  ADAMTS  salivar  deR.  neglectus  (Rod  n  ADAMTS).  Foi  realizada  a  caracterização  in  silico  da  sequência  aminoacídica  da  Rod  n  ADAMTS.  A  sequência  nucleotídica  foi  clonada  no  vetor  de  expressão  pET100/D-TOPO,  o  qual  foi  utilizado  para  transformar  bactérias  E.  coli  BL21(DE3).  Após  a  seleção  dos  clones,  a  expressão  da  proteína  recombinante  foi  induzida  pela  adição  de  0,4  mM  de  IPTG  por  6  h  a  37  oC,  e  verificada  por  SDS-PAGE  12%e  western  blotting.  Rod  n  ADAMTS  foi  purificada  da  fração  insolúvel  do  extrato  bacteriano  por  cromatografia  de  afinidade  ao  níquel.  A  sequência  nucleotídica  da  Rod  n  ADAMTS  apresenta  1698  pb,  codifica  para  uma  proteína  com  566  resíduos  de  aminoácidos  e,aproximadamente,  64  kDa.  Os  15  primeiros  resíduos  de  aminoácidos  constituem  um  peptídeo  sinal,  sugerindo  que  a  protease  é  secretada  pela  via  clássica.  Há  sítios  putativos  de  N-glicosilação  e  fosforilação.  Foi  observada  a  síntese  da  Rod  n  ADAMTS  com  peso  molecular  esperado  apenas  na  fração  insolúvel  do  extrato  bacteriano.  O  estudo  da  ADAMTS  recombinante  da  saliva  deR.  neglectus  pode  contribuir  para  a  compreensão  das  interações  inseto-hospedeiro  e  inseto-patógeno  e  de  processos  biológicos  fundamentais  como  a  sobrevivência  e  a  adaptação  de  vetores  e  a  transmissão  de  agentes  infecciosos.  

 

 



Palavras-chaves:  ADAMTS recombinante, Doença de Chagas, Rhodnius neglectus, Saliva, Triatomíneo