PRODUÇÃO DE ADAMTS RECOMBINANTE DA GLÂNDULA SALIVAR DE RHODNIUS NEGLECTUS
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Os triatomíneos hematófagos são insetos que atuam como transmissores do Trypanosoma cruzi, um protozoário que é o agente etiológico da Doença de Chagas. Rhodnius neglectus é uma espécie de triatomíneo silvestre, considerada vetor secundário no Brasil Central. A saliva dos triatomíneos contém moléculas bioativas eficientes, relacionadas ao hábito de alimentação sanguínea, que ao serem inoculadas pela picada, neutralizam a hemostase e modulam reações inflamatórias e as respostas imunológicas de seus hospedeiros vertebrados. A saliva de R. neglectus contém proteases e já foi descrita a presença de uma desintegrina e metaloproteinase com motivos de trombospondina (ADAMTS). As ADAMTS podem desempenhar um papel essencial na hematofagia, influenciando, sobretudo, na coagulação sanguínea, fibrinólise e no sistema calicreína-cininas. O objetivo desse trabalho é realizar o estudo da ADAMTS salivar deR. neglectus (Rod n ADAMTS). Foi realizada a caracterização in silico da sequência aminoacídica da Rod n ADAMTS. A sequência nucleotídica foi clonada no vetor de expressão pET100/D-TOPO, o qual foi utilizado para transformar bactérias E. coli BL21(DE3). Após a seleção dos clones, a expressão da proteína recombinante foi induzida pela adição de 0,4 mM de IPTG por 6 h a 37 oC, e verificada por SDS-PAGE 12%e western blotting. Rod n ADAMTS foi purificada da fração insolúvel do extrato bacteriano por cromatografia de afinidade ao níquel. A sequência nucleotídica da Rod n ADAMTS apresenta 1698 pb, codifica para uma proteína com 566 resíduos de aminoácidos e,aproximadamente, 64 kDa. Os 15 primeiros resíduos de aminoácidos constituem um peptídeo sinal, sugerindo que a protease é secretada pela via clássica. Há sítios putativos de N-glicosilação e fosforilação. Foi observada a síntese da Rod n ADAMTS com peso molecular esperado apenas na fração insolúvel do extrato bacteriano. O estudo da ADAMTS recombinante da saliva deR. neglectus pode contribuir para a compreensão das interações inseto-hospedeiro e inseto-patógeno e de processos biológicos fundamentais como a sobrevivência e a adaptação de vetores e a transmissão de agentes infecciosos. |