Comparação de métodos de extração de RNA para diagnostico de infecções por Zika Vírus
ANDRÉA CRISTINA BOTELHO SILVA ¹, THAMYRIS FARJADO¹, LUCAS RODRIGUES LARANJA ¹, ALEXANDRA SIQUEIRA MELLO¹, COORTE ZIKA GRUPO DE ESTUDO¹, DANILA VEDOVELLO¹, SAULO DUARTE PASSOS¹
1. FMJ - FACULDADE DE MEDICINA DE JUNDIAÍ -Laboratório de Infectologia Pediátrica
andreabotelhobm@gmail.com

O Zika vírus (ZIKV), pertence a família Flaviviridae e gênero flavivírus e é transmitido por mosquitos do gênero Aedes, através da picada da fêmea infectada. Foi isolado em 1947 a partir de um macaco sentinela na floresta Zika em Uganda, leste da África e foi responsável por casos esporádicos em humanos na África e na Ásia, até recentemente, quando um grande surto ocorreu no Oceano Pacifico e nas Américas. A infecção pelo ZIKV é geralmente leve e autolimitada. Porém, houveram relatos de associação de infecção por ZIKV à casos de má formação congênita e microcefalia, devido à transmissão transplacentária e Sindrome de Guillan-Barré, em adultos. No Brasil, o ZIKV foi detectado maio de 2015 e mais de 700.000 casos já foram oficialmente notificados. O ZIKV é um vírus de RNA fita simples, positivo e apresenta envelope glicoproteico. O RNA é mais instável pois a presença do grupo 2'-hidroxila (-OH) o que o torna propenso a auto-hidrólise. Por essa razão, metodos moleculares que demandam a extração do RNA e seu posterior armazenamento, devem ser otimizados. Esse estudo realizou o diagnóstico molecular das infecções por ZIKV em gestantes acompanhadas em coorte. Foram avaliados dois métodos para extração por RNA, comparada a sensibilidade de detecção do vírus e quantificada a carga viral do ZIKV, por RT-qPCR. O RNA do vírus foi extraído a partir de amostras de urina e saliva, usando o protocolo Trizol como padrão, em comparação ao kit comercial Qiagen, 765 mães participaram do estudo, sendo que 53 foram positivas para ZIKA em alguma das amostras. Dessas, 53 foram destinadas à comparação dos métodos: A quantificação do RNA apresentou diferença entre os métodos, sendo que o Trizol extraiu em média 10,84 µg/uL de RNA e o Qiagen 13,0 µg/uL. Através da RT-qPCR, 07 amostras foram positivas pelo método Trizol e 15 pelo kit Qiagen. A Especificidade e sensibilidade do Qiagen em relação ao Trizol foram de 75% e 65%, respectivamente. Dentre os positivos, a carga viral teve variação de até 10% Contudo o Qiagen apresentou maior carga viral detectável. As metodologias aplicadas para extração em diagnostico foram adequadas, sendo que os valores de quantificação e a carga viral variaram muito de um kit para outro, com variação nos resultados positivos e negativos para os diferentes métodos.