DESENVOLVIMENTO DE UM DIAGNÓSTICO MOLECULAR PARA DOENÇA DE CHAGAS
CÍNTIA NASCIMENTO DA COSTA-OLIVEIRA¹, MARIA GABRIELLA NUNES DE MELO¹, VICTOR VAITKEVICIUS ANTÃO DE SOUZA¹, TAYNÁ CORREIA DE GOES¹, RAYANA CARLA SILVA DE MORAIS¹, RÔMULO PESSOA-E-SILVA¹, KAMILA KÁSSIA DOS SANTOS OLIVEIRA¹, LEYLLANE RAFAEL MOREIRA¹, MICHELLE DA SILVA BARROS¹, MINEO NAKASAWA¹, VIRGÍNIA MARIA BARROS DE LORENA¹, MILENA DE PAIVA-CAVALCANTI¹
1. IAM - INSTITUTO AGGEU MAGALHÃES
cintiancosta_91@hotmail.com

A doença de Chagas é uma condição negligenciada com elevada carga de morbimortalidade, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e acomete indivíduos em todo o mundo.   O diagnóstico etiológico realiza-se através da detecção do parasito no organismo ou por métodos imunológicos, nas fases aguda e crônica, respectivamente. Porém há dificuldade na confirmação sorológica de casos inconclusivos ou discordantes. Para o diagnóstico conclusivo, o Ministério da Saúde recomenda a Reação em Cadeia Polimerase (PCR) como teste confirmatório. No entanto, não existe uma PCR, seja qualitativa ou quantitativa, padronizada e validada nacionalmente. Desta forma, o objetivo do nosso grupo de pesquisa é desenvolver uma técnica voltada ao diagnóstico molecular e quantitativo da doença de Chagas que venha a ser implementado na rotina do Serviço de Referência em doença de Chagas (SRDC) da Fiocruz-PE. Assim, com auxílio do software Mega7, o alinhamento múltiplo das sequências do kDNA e do SAT-DNA de T. cruzi, disponíveis no banco de dados GenBank (sequências brutas disponíveis publicamente em http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo, com números de acesso: M18816.1 e GU0593421, respectivamente), foi realizado no intuito de identificar potenciais regiões alvo. As avaliações de especificidade, análises da conservação, cobertura e identidade das sequências foram realizadas por meio do Basic Local Alignment Search Tool nucleotide (BLASTn). Para o desenho dos primers foi utilizado o software Primer BLAST. Para detecção do kDNA foram desenhados os sistemas TcB (F 5’ AGGCATTGGTCTGAGTTGTGT 3’, com CG 48% e T m 52,4°; R 3’ ACACCAATACCTACCACCACTT 5’, com CG 45% e T m 53°) e CzB (F 5’ AGGTGGGGGTTCGATTGG 3’, com CG 61% e T m 52,6°; R 3’ CCTACCACCACTTAAATACAG 5’, com CG 43% e T m 50,5°); e para o SAT-DNA, TcSAT (F 5’ AAATTCCTCCAAGCAGCGGA 3’, com CG 50% e T m 51,8°; R 3’ ATGAATGGCGGGAGTCAGAG 5’, com CG 55% e T m 53,8°) . Serão realizados ensaios moleculares para padronizar as condições de reação dos primers , visando o alcance de um sistema sensível e específico na detecção do DNA de T. cruzi em amostras de portadores da infecção.