ÍNTRONS COMO NOVOS ALVOS PARA GENOTIPAGEM DE GIARDIA LAMBLIA |
Giardia lamblia é um protista parasita cosmopolita, que acomete principalmente indivíduos com hábitos precários de higiene, ocasionando uma infecção intestinal. A transmissão pode ser via fecal-oral, ingestão de água e alimentos contaminados e ato sexual. Atualmente, os isolados de G. lamblia são agrupados em oito genótipos (A a H) onde A e B infectam a maior variedade de espécies hospedeiras, e parecem ser os principais (ou possivelmente únicos) genótipos que infectam seres humanos. A análise preliminar do banco de dados do parasita demonstrou-se tratar de genoma compacto com poucos íntrons ou relíquias mitocondriais. Neste trabalho buscamos obter informações sobre a natureza composicional dos íntrons nos diferentes genótipos de G. lamblia , verificar como estes se arranjam durante a transcrição nas fases do ciclo evolutivo e analisar a influência sobre o perfil de expressão proteica. Para isso, foi realizado cultivo de G. lamblia com realização de curva de crescimento, onde o RNA total dos trofozoítos da cepa WB foi extraído em diferentes momentos celulares e utilizado para síntese de cDNA, molde na amplificação pela PCR dos genes e/ou íntrons. A análise de sequências no Giardia DB demonstrou que os genotipos A, B e E de G. intestinalis possuem introns em três genes codificantes de proteínas (Proteína ribossomal L7a, Ferrodoxina 2Fe-2S e cadeia leve de Dineína). Não foi observada conservação das sequências destes introns entre os genótipos, sinalizando uma possível utilização como marcadores moleculares em estudos de genotipagem. Verificamos que o genoma da cepa WB, genotipo A, possui outros introns em genes codificantes de RNAt-Gln e RNAt-Tyr. Foi evidenciada a presença de possíveis uORFs nos introns de Rpl7a , 2Fe-2S Ferridoxina e Dynein . Os íntrons de G. lamblia apresentam potencial aplicação na genotipagem do parasito. Mais estudos deverão ser realizados para verificar a presença destes introns nos diferentes genótipos por Northern blot detectando o mRNA específico. |