PADRONIZAÇÃO DO MÉTODO IMUNOLÓGICO DOT BLOT- MEAr PARA INDIVÍDUOS INFECTADOS POR Schistosoma mansoni EM ÁREA ENDÊMICA DE MONTES CLAROS- MG |
Análises prévias utilizando a proteína MEAr tem demonstrado grande potencial imunogênico para detecção da infecção por Schistosoma mansoni , e considerando a necessidade do uso de metodologias rápidas, de alta sensibilidade e baixo custo, este estudo padronizou pela primeira vez o método imunológico Dot Blot-MEAr. Para execução e padronização do método um total de 50 amostras de soro humano coletadas em 2017 no distrito rural de Tabuas, área endêmica de Montes Claros- MG e previamente testadas por métodos de Kato-Katz e gradiente salínico em outros projetos foram utilizadas. Uma membrana de PVDF foi sensibilizada com a proteína MEAr e incubada em blocking buffer, em seguida as amostras foram adicionadas em duplicatas separadas por spots. A membrana foi incubada em solução de blocking buffer com anticorpo anti IgG- HRP humano e a reação revelada em kit ECL, as imagens foram capturadas em LAS 4000. Cada spot foi analisado por intensidade de reação no software Image J com determinação de cut- off no software GraphPad Prism. O método indicou 33 amostras positivas em fase aguda e 17 negativas e a determinação de cut-off resultou em 77% de sensibilidade e 50% de especificidade com a padronização. Considerando o perfil de baixa carga parasitária em indivíduos infectados no Brasil, fato que induz a dificuldade de detecção e diagnóstico da doença, a padronização do método com a proteína MEAr demonstrou alto índice de sensibilidade, reduzindo a obtenção de resultados falsos negativos. Este pode ser um método usual, eficiente e de baixo custo que pode ser introduzido para auxilio ou substituição à técnicas atuais que demandam maior tempo para execução. |