ESTUDO DA ASSOCIAÇÃO DE BIOMARCADORES PARA TRYPANOSOMA CRUZI E HUMANOS EM UMA COORTE DE PACIENTES COM DIFERENTES FORMAS CLÍNICAS DA DOENÇA DE CHAGAS CRÔNICA |
A doença de Chagas (DC) é uma das principais enfermidades na América Latina, tendo como agente etiológico o protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi . A DC é caracterizada por amplo espectro de desfechos clínicos, variando em severidade desde infecções assintomáticas até as formas graves relacionadas a danos cardíacos e digestivos. No tocante ao parasito, sua heterogeneidade intraespecífica tem sido largamente investigada e a correlação dos diferentes genótipos com as manifestações clínicas da doença ainda é um grande desafio. O perfil genético do hospedeiro e a resposta imune frente à infecção são considerados fatores potencialmente importantes na progressão da doença. Este trabalho pretende correlacionar a carga parasitária e o genótipo de T. cruzi circulante com o perfil genético de um grupo de pacientes com DC crônica atendidos no INI/Fiocruz, através da análise do perfil de SNPs existentes em genes relacionados à resposta imune. Foram realizados ensaios utilizando PCR em Tempo Real quantitativa (qPCR) para estimar a carga parasitária de T. cruzi no sangue, tendo como alvos moleculares o DNA nuclear satélite do parasito e o controle interno exógeno de amplificação (IAC), em um sistema TaqMan multiplex. A caracterização molecular do T. cruzi em DTUs de I a VI esta sendo conduzida seguindo metodologia previamente padronizada em nosso laboratório, baseada em reações de PCR convencional multilocus. A identificação subsequente dos genótipos se baseia no conjunto dos perfis dos produtos de PCR apresentados para cada alvo, utilizando os seguintes marcadores moleculares: a região intergênica do Spliced Leader , o domínio variável D7 do gene da subunidade 24Sα do RNA ribossomal e a região do fragmento nuclear A10. Até o presente momento, realizou-se a extração de DNA de 376 amostras de sangue. Contudo, a qPCR foi realizada para 338 amostras, das quais 160 (47,3%) foram positivas para T. cruzi . A carga parasitária variou entre 0,003 ± 0,002 à 72,21 ± 8,26 equivalentes de parasitos/mL, tendo mediana de 0,28 eq. de parasitos/mL. Em relação ao genótipo do parasito, foi possível a genotipagem de 95 amostras entre as 160 positivas, sendo que 47,5% foram correlacionadas a DTU II/VI e 28,5% a DTU II. A terceira parte deste projeto, relacionada à genotipagem dos SNPs de citocinas de genes humanos, encontra-se em fase inicial de padronização. Desta forma, ao analisar em conjunto o parasito e o hospedeiro, esperamos identificar novos biomarcadores para a DC crônica. |