AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE CELULAR EM CÃES FRENTE À UMA PROTEÍNA QUIMÉRICA (Q1) DE Leishmania infantum
VICTOR VAITKEVICIUS ANTÃO DE SOUZA ^1,2, LAYS ADRIANNE MENDONÇA TRAJANO SILVA^1,2, WAGNER J. T. DOS SANTOS^1,2, ARTUR L. DE CASTRO NETO^1,2, FRANKLIN B. MAGALHÃES^1,2, RÔMULO PESSOA E SILVA^1,2, GILSAN APARECIDA DE OLIVEIRA^1,2, MARIA GABRIELLA NUNES DE MELO^1,2, OSVALDO P. DE MELO NETO^1,2, VÍRGINIA M.B. DE LORENA^1,2, MILENA DE PAIVA CAVALCANTI^1,2
1. FAFIRE - Faculdade Frassinetti do Recife, 2. IAM/FIOCRUZ-PE - Instituto Aggeu Magalhães/ Fundação Oswaldo Cruz- Pernambuco, 3. UNITA - Centro Universitário Tabosa de Almeida ASCES, 4. CESMAC - Centro Universitário CESMAC, 5. FACIPE - Faculdade Integrada de Pernambuco
victorvaitkeantao@gmail.com

Introdução : a imunoprofilaxia / imunoterapia em prol de cães ( Canis lupus familiaris ) infectados com Leishmania infantum é apontada como uma das poucas estratégias que podem, de fato, controlar a leishmaniose visceral (LV). Pesquisadores do Instituto Aggeu Magalhães (IAM/FIOCRUZ-PE), juntamente com colaboradores do Instituto Gonçalo Moniz (IGM/FIOCRUZ-BA), identificaram e estudaram alguns novos antígenos recombinantes promissores de L. infantum , os quais confirmaram sua antigenicidade em cães. A partir destes antígenos, novas proteínas quiméricas foram construídas (Q1 – Q5), contendo regiões antigênicas dos melhores Lci's. Objetivo : analisar in vitro a resposta imune celular em cães com e sem LV, frente à proteína quimérica Q1, a fim de determinar o seu potencial para a aplicação em estudos de vacinologia para a LV. Metodologia : foram feitas coletas de sangue de 6 cães por grupo (n total = 18): Controle, Sintomáticos e Assintomáticos, provenientes de áreas endêmicas do estado de Pernambuco, e em seguida foi realizado o cultivo das Células Mononucleares do Sangue Periférico (PBMCs), com o estímulo dos antígenos Q1 e solúvel de L. infantum (LSA) nas concentrações de 2,5µg/mL e 25µg/mL, respectivamente, no tempo de 48 horas. Após os tempos de cultivo, foi feita a extração de RNA por TRIzol e posteriormente a transcrição reversa para cDNA utilizando o kit comercial TaqMan ^® Reverse Transcription reagentes . A avaliação da expressão gênica (quantificação do cDNA das citocinas IFN- γ, TNF, IL10 e TGF-β) foi realizada pelo método do Ct ( Cycle threshold ) comparativo, por qPCR em tempo real. O teste T de Student e Mann-Whitney foram empregados para comparação entre grupos, considerando diferenças significativas quando p≤0,05. Resultados : avaliando o grupo Controle, pôde-se observar uma supressão das citocinas IL-10 ( RQ =0,006) e TGF-β ( RQ = -0,55), com expressão maior da citocina IFN- γ ( RQ = 0,94), quando comparadas com o LSA (IFN- γ RQ= 0,36). Para os grupos Sintomáticos (S) e Assintomáticos (A), também ocorreu uma supressão de IL-10 e TGF-β, com expressão positiva de IFN- γ (S RQ = 0,15; A RQ = 0,05) após estímulo com Q1, ainda que inferior quando comparada com o LSA (S RQ = 0,50; A RQ= 0,42). Conclusão : a proteína quimérica Q1 sugere um potencial para imunoprofilaxia e imunoterapia. Será realizada uma avaliação da produção de citocinas no ambiente intracelular, para finalizar a caracterização do perfil imunológico da Q1, e assim avançar com os ensaios in vivo .