UTILIZAÇÃO DE IMPRINT DE LESÃO EM PAPEL DE FILTRO NO DIAGNÓSTICO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR ATRAVÉS DA QPCR DUPLEX-ITS |
A leishmaniose tegumentar (LT) é causada por várias Leishmania spp., que associada ao estado imunológico do paciente, confere a doença diferentes aspectos e níveis de gravidade das lesões leishmanióticas, interferindo na terapia preconizada. O diagnóstico da LT pode ser obtido através do isolamento do parasito e/ou histopatológico da biópsia de lesão, porém a pesquisa direta (PD) da escarificação da lesão é a técnica mais usada. Logo, é necessário o fornecimento de um método sensível que ofereça mais informações ao diagnóstico, tais como quantificar a carga parasitária e identificar a espécie; além de utilizar espécime clínico menos invasivo. O objetivo deste estudo foi avaliar, em diferentes amostras clínicas, a aplicabilidade da qPCR-duplex ITS, desenvolvida pela equipe através da tecnologia TaqMan probe , para diagnosticar, quantificar e identificar Leishmania spp. Obteve-se amostras de sangue, biópsia e imprint em papel de filtro de lesão pós-escarificação de pacientes com PD positiva/negativa (padrão-ouro), provenientes dos estados de Pernambuco e Amazonas. O DNA das amostras foi extraído com kit comercial, e testado na qPCR-duplex, a qual tem como alvo o Internal Transcribed Spacer (ITS), identificando espécies do subgênero Viannia (sistema SSV) e L . amazonensis (sistema SLa). DNA de L . braziliensis e L . amazonensis foram usados como controles da reação. Os dados foram analisados em valores percentuais e absolutos, e a concordância entre os métodos através da estatística de Kappa ( k ). Foram obtidas um total de 80, 18 e 112 amostras de sangue, biópsia e imprint , respectivamente. Os resultados da qPCR-duplex ITS e PD concordaram em 15 (18,75%) amostras de sangue, 9 (50%) de biópsia, e 105 (93,75%) de imprint . Comparando os testes realizados com as diferentes amostras, a análise estatística mostrou significância apenas para os imprint ( p< 0,001 ), com 93,62% de sensibilidade, 94,44% de especificidade e concordância substancial entre as técnicas ( k =0,79). Quanto a identificação da espécie, 98,88% das amostras de imprint foram positivas para o sistema SSV e 1,12% para o SLa, com carga parasitária média de 513834,4 fg/µL e 172.861 fg/µL, respectivamente. Portanto, a qPCR-duplex ITS se mostrou um método tão efetivo quanto a PD, acrescentando a vantagem de prover quantificação e direcionamento da Leishmania sp. responsável pela lesão; além de usar amostra menos desconfortável ao paciente; e fornecendo assim, um diagnóstico mais completo e aprimorado da LT. |