EXTRAÇÃO DO DNA DE Treponema pallidum: COMPARAÇÃO DE PROTOCOLOS IN HOUSE E COMERCIAIS
JULIA BRAGA PEREIRA ¹, ANA EMÍLIA COSTA ARAÚJO DE AQUINO¹, ELIS DIONÍSIO DA SILVA¹, PATRÍCIA MARIA SOBRAL DE OLIVEIRA¹
1. FIOCRUZ/PE - Instituto Aggeu Magalhães
JUH-BRAGA@HOTMAIL.COM

A sífilis é uma doença infectocontagiosa sexualmente transmissível, considerada um problema de saúde pública no Brasil. Nesse contexto, o diagnóstico adequado e precoce da doença surge como fator importante no combate à sífilis. Atualmente seu diagnóstico se dá predominantemente por técnicas sorológicas. No entanto, estudos apontam que essas técnicas apresentam muitas limitações, a depender do estágio da doença, além de elevadas taxas de falsos-positivos. O diagnóstico molecular tem sido apontado como uma alternativa a esses métodos. Diante disso, este trabalho tem como objetivo avaliar protocolos de extração de DNA do Treponema pallidum em amostras de sangue total de pacientes com sífilis. Para isso, foi realizado estudo comparativo descritivo entre quatro métodos de extração de DNA em amostras de sangue total (n=20) com diagnóstico sorológico positivo para síflis: Fenol-clorofórmio (FC); Acetato de potássio-clorofórmio (AC); Instagene ^TM Matrix - BioRad ^® (IM); e ReliaPrep ^TM Blood gDNA Miniprep System - Promega ^® (RP). Cada método foi avaliado a partir dos parâmetros de concentração e pureza do DNA extraído, por meio de espectrofotometria. Avaliou-se também a praticidade considerando a média de tempo despendido em cinco extrações e os equipamentos necessários para a execução de cada técnica. A maior concentração de DNA obtida foi com FC (128,53ng/µl), no entanto a relação de pureza 260/280, foi melhor em AC (1,91). Nenhuma das técnicas apresentou relação de pureza 260/230 entre o intervalo ideal. Variações nessas relações indicam presença de contaminantes que podem influenciar nas técnicas moleculares. RP foi o método mais prático, por demandar menos tempo (42,8min) e necessitar de menos equipamentos para sua execução. Com isso, como conclusão preliminar, temos que os kits comerciais avaliados não correspondem a métodos eficientes, apesar da praticidade. Enquanto que os métodos in house avaliados mostraram-se, tanto qualitativa quanto quantitativamente, mais eficientes para o diagnóstico molecular da sífilis.