CONSTRUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA LINHAGEM CELULAR HEK-293-L-SIGN E SUA APLICAÇÃO EM ESTUDOS DE REPLICAÇÃO DO VÍRUS ZIKA
LIVIA VICENTE DE OLIVEIRA ¹, CLÁUDIO LUIZ DE FRANÇA NETO¹, RENATO ANTONIO DOS SANTOS OLIVEIRA¹, EDMILSON FERREIRA DE OLIVEIRA FILHO¹, JOSÉ VALTER JOAQUIM SILVA JUNIOR¹, LAURA HELENA VEGA GONZALES GIL¹
1. IAM - FIOCRUZ - Instituto Aggeu Magalhães, 2. UFPB - Universidade Federal da Paraíba
liviaolvr@gmail.com

As lectinas tipo c são proteínas de ligação a carboidratos, capazes de agir como receptores de adesão celular e reconhecimento de vários tipos de patógenos. Dessa forma, estas lectinas servem como receptores celulares para alguns vírus, incluindo os flavivírus. Portanto, o trabalho em questão tem como objetivos a construção de uma linhagem celular capaz de expressar o receptor de membrana L-SIGN e analisar a associação entre esse receptor e a infecção in vitro pelas diferentes cepas do vírus Zika (ZIKV). Para isso, realizou-se a transfecção do plasmídeo PCDNA3-L-SIGN contendo a região codificadora do L-SIGN e o gene de resistência à geneticina em células da linhagem HEK 293. As células transfectadas foram selecionadas em meio contendo geneticina (300 µg/mL) e posteriormente isolou-se um clone por diluição limitante. As células HEK 293 e o clone obtido foram então marcados com anticorpos monoclonais específicos para L-SIGN e comparados por análise de citometria de fluxo. A análise demonstrou um aumento de cerca de 10 vezes na intensidade de fluorescência do clone em relação à linhagem selvagem. Em seguida, infectou-se as linhagens celulares pelo isolado 243 do ZIKV e foi realizada uma nova análise por citometria após 48 horas, para que fossem comparadas as taxas de infecção entre as duas linhagens. Observou-se em cada leitura duas populações celulares distintas, correspondentes às células infectadas e não infectadas. A taxa de células infectadas pelo ZIKV foi de 0,5% na linhagem HEK 293 e de 9,79% nas células transfectadas. Dessa forma, esses resultados apontam que as células transfectadas são fenotipicamente diferentes da linhagem HEK 293 selvagem, sugerindo que as primeiras foram capazes de expressar o receptor L-SIGN. Os resultados também sugerem que a presença desse receptor na superfície das células transfectadas foi responsável por um aumento de 9,29% na infecção pelo ZIKV. Indicando que o L-SIGN pode desempenhar um papel na entrada desse vírus nas células.