MAPEAMENTO DOS EPITOPOS B DA PROTEINA ALT-2 DE Wuchereria bancrofti E DESENVOLVIMENTO DE UM IMUNOSENSSOR ELETROQUIMICO |
INTRODUÇÃO : A filariose linfática (LF) é uma doença tropical negligenciada transmitida por mosquitos e a segunda causa de incapacidade permanente levando a uma taxa de morbilidade e mortalidade significativa. OBJETIVOS : Mapear os epitopos B lineares da proteína abundante transcrito-2 larvar (ALT-2) e desenvolver um teste rápido tipo “point of care”. MÉTODOS : Os epitopos B lneares foram identificados usando uma biblioteca de peptídeos sintéticos obtidos pela técnica de Spot-synthesis e soro de pacientes crônicos. A especificidade foi avlaida por Neste estudo, um dos epítopos (Wb/ALT2-A5) foi usado para construir um imunossensor eletroquímico. A técnica eletroquímica de voltametria cíclica foi realizada para detectar o sinal gerado pela interação entre o péptido (Wb/ALT2-A5) e anticorpos de soro de pacientes. RESULTADOS : Dez epitopos foram identificados, e a especificidade e sensibilidade avaliadas por ferramentas de bioinformática e teste de ELISA usando um painel de peptídeos sintéticos e soro de pacientes portadores de várias patologias. O peptídeo que apresentou maior especificidade foi imobilizado com sucesso num eletrodo de carbono (SPCE) através de grupos amina via quitosana usando glutaraldeído como agente de reticulação. Em seguida, foram aplicados soros de pacientes com Wuchereria bancrofti e as respostas eletroquímicas foram geradas aplicando um potencial de 0,6 a 0,6 V, taxa de varredura de 0,025 V/s. DISCUSSÃO: Uma sensibilidade de 1,86 µA e um limite de detecção de 5,0 µg mL −1 para o peptídeo sintético (Wb / ALT2-A5) e 0,002 µg mL −1 para soro humano fora, calculados. CONCLUSÃO : O desempenho deste ensaio foi testado com sucesso com soro de pacientes infectados e saudáveis. Assim, este imunossensor é capaz de identificar anticorpos circulantes, podendo ser aplicado no diagnóstico da bancroftiose. |