MAPEAMENTO DE EPÍTOPOS DE PROTEÍNAS DE MEMBRANA EXTERNA DE Leptospira interrogans
PRISCILA DE SIMONE GONÇALVES^1,3, PALOMA PALOMA NAPOLEÃO-PÊGO^1,3, JORGE LUIZ SOARES PINA^1,3, ANDRÉ LUIS ALMEIDA SOUZA^1,3, FLAVIO ROCHA SILVA^1,3, SALVATORE GIOVANNI DE-SIMONE ^1,3
1. FIOCRUZ/CDTS - Fundação Oswaldo Cruz/RJ, 2. FIOCRUZ/IOC - Fundação Oswaldo Cruz/RJ, 3. UFF - Universidade Federal Fluminense
flavio.rocha@ioc.fiocruz.br

INTRODUÇÂO : A leptospirose é uma zoonose emergente de nível global e de grande importância, causada por infecção com espécies de Leptospira patogênicas, merecendo destaque principalmente nos países em desenvolvimento. Recentemente, casos endêmicos e epidêmicos de hemorragia pulmonar grave têm sido reconhecidos como mais uma importante manifestação relacionada à leptospirose. O diagnóstico precoce na fase aguda da infecção é importante e necessário para se iniciar a antibioticoterapia. Vários ensaios de ELISA foram desenvolvidos para o diagnóstico em humanos e animais. Entretanto estes testes apresentam baixas sensibilidade e especificidade principalmente na fase aguda da infecção. As proteínas de membrana externa (OMPs), predominam na membrana externa da bactéria e são altamente conservadas entre as diferentes espécies de Leptospira. Portanto, essas OMPs são importantes alvos para o desenvolvimento de novos testes de diagnóstico. OBJETIVOS : Mapear todos os epítopos IgG de 6 proteínas de L. interrogans, identificando os epítopos de reação cruzada e específicos para compor insumo para o desenvolvimento de um novo teste de diagnóstico sorológico rápido e específico. METODOLOGIA: Uma biblioteca de 321 peptídeos cobrindo toda a extensão de 6 proteínas [(LipL32, LipL41, LipL49, ISD, peptidase sinal (PS), serino protease (SP)], com um comprimento de 15aa e sobreposição de 9aa foi sintetizada e avaliada para a reatividade de anticorpos IgG por metodologia de alto rendimento de microarranjos peptídicos. As sequencias dos epítopos identificados foram confrontadas em banco de proteínas, usando ferramentas de bioinformática, para identificar possíveis reações cruzadas. A especificidade foi confirmada através de ELISA usando MAPs. RESULTADOS: Foram identificados 64 epítopos IgG abrangendo toda a extensão das 6 proteínas de L. interrogans. A SP apresentou maior antigenicidade seguida da ISD e LipL49. Entretanto a LipL32 apresentou o maior numero de epitopos específicos. CONCLUSÃO : A especificidade de epítopos indica a possibilidade concreta de serem obtidos insumos com potencial de desenvolvimento de novos ensaios diagnóstico imunológicos mais específicos para a Leptospirose. DISCUSSÂO: Esforços estão sendo empreendidos para a construção de uma quimera molecular para uso diagnóstico.