AVALIAÇÃO DA qPCR 18S E qPCR PvMtCOX1 NA IDENTIFICAÇÃO DE RESISTÊNCIA DO P. vivax À CLOROQUINA
LAILA R. A. BARBOSA ^1,2, EMANUELLE L. DA SILVA^1,2, ANNE C. G. DE ALMEIDA^1,2, YANKA E. A. R. SALAZAR^1,2, NÉLIDA T. S. RÚA^1,2, MARIA CAROLINA PUÇA^1,2, ANDRÉ M. SIQUEIRA^1,2, WUELTON M. MONTEIRO^1,2, MARCUS V. G. DE LACERDA^1,2, INGRID FELGER^1,2, GISELY C. DE MELO^1,2
1. FMT-HVD/IPCCB - Fundação de Medicina Tropical Dr. Heitor Vieira Dourado/Instituto de Pesquisa Clínica Carlos Borborema, 2. ESA/UEA - Escola Superior de Ciências da Saúde, Universidade do Estado do Amazonas, 3. UNINILTONLINS - Universidade Nilton Lins, 4. FAMETRO - Faculdade Metropolitana de Manaus , 5. ILMD – FIOCRUZ - Instituto Leônidas e Maria Deane, Fundação Oswaldo Cruz, 6. SWISS TPH - Swiss Tropical and Public Health Institute, 7. UNIVERSITY OF BASEL - University of Basel, 8. FIOCRUZ-MANGUINHOS - Fundação Oswaldo Cruz, Presidência da Fiocruz, Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas.
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Malária é uma hemoparasitose infecciosa febril aguda, tendo o P. vivax como agente etiológico predominante no Brasil. Devido ao tropismo por reticulócitos é comum as baixas parasitemias, o que dificulta o diagnóstico pela gota espessa, atual método padrão ouro, o indivíduo permanece sem tratamento podendo ser assintomático e possibilita a continuidade da transmissão. Outro ponto é a resistência a cloroquina (CQ), droga utilizada para tratamento. Dessa forma, existe a necessidade de outros métodos mais sensíveis na busca de resistência à CQ e de infecções assintomáticas. Nos ensaios de qPCR para P. vivax , o mtDNA tem sido um alvo com alta especificidade e sensibilidade, proporcionando uma qPCR ultrassensível. O objetivo do trabalho foi avaliar a eficiência da qPCR 18S e qPCR PvMtCOX1 em detectar resistência à cloroquina in vivo pelo P. vivax . Tratou-se de duas coortes realizadas entre 2010 e 2017, na FMT-HVD. Foram recrutados pacientes com malária vivax, com gota espessa positiva, tratados com cloroquina e acompanhados por 42 dias com visitas periódicas, em que foram coletadas amostras sanguíneas e gota espessa. Foram selecionadas amostras do dia 28 de acompanhamento, realizada extração de DNA, qPCR 18S rDNA e qPCR PvMtCOX1 em busca de recorrências submicroscópicas. As análises foram realizadas com Software IBM_SPSS v.21 e executados teste não-paramétrico de Mann-Whitney e avaliação da concordância, pelo coeficiente Kappa, com IC de 95%. Foram incluídas 312 amostras para extração de DNA, 34 (10,9%) amostras foram positivas para qPCR PvMtCOX1, 15 (4,8%) para qPCR 18S rDNA e apenas 5 (1,6%) foram positivas na gota espessa. qPCR PvMtCOX1 concordou 100% em positividade com os outros testes. A média de parasitemia obtida para a gota foi de 1710,60 parasitas/mm³ de sangue, para o Pv18S foi de 525,29 cópias/μL de DNA e 2755,65 cópia/μL de DNA para PvMtCox1. Entre as técnicas de qPCR pelo teste de Mann-Whitney foi obtido o valor de p<0,0001 e a análise de correlação mostrou que as quantificações das qPCRs tendem a crescer juntas. Os resultados obtidos superaram os números esperados para infecções submicroscópicas devido à resistência de CQ na região, ressaltando a necessidade do desenvolvimento e implementação de testes mais sensíveis para diagnóstico e acompanhamento de pacientes acometidos com malária vivax, a fim de favorecer a tomada de decisões mais assertivas visando a eliminação radical da doença.