ACOMPANHAMENTO DA PARASITEMIA DE PACIENTES COM MALÁRIA POR REAÇÕES DE CADEIA POLIMERASE EM TEMPO REAL (qPCR) PREVIAMENTE PADRONIZADAS PARA DIFERENTES ALVOS MOLECULARES DE PLASMÓDIOS |
A malária é considerada uma das principais doenças infecciosas em regiões tropicais e subtropicais do mundo. Causada por protozoários do gênero Plasmodium , a malária possui cinco espécies, e três dessas espécies são encontradas no Brasil , P. vivax, P. falciparum e P. malarie . O diagnóstico rápido e eficiente desse tipo de infecção permanece como um dos pilares dos programas de controle no mundo, já que com ele é possível a identificação precoce de casos e adoção de tratamento apropriado. Vários são os métodos utilizados atualmente para o diagnóstico da malária, sendo o exame de microscopia estabelecido como padrão- ouro em todo mundo, mas que, devido a sua grande limitação principalmente no caso de co-infecção e baixa parasitemia, a técnica de PCR tem ocupado cada vez mais espaço neste contexto, e alvos moleculares ribossomais e não ribossomais vêm sendo descritos como métodos eficientes para a detecção de malária. Sendo assim, essa pesquisa propõe acompanhar a parasitemia por qPCR de pacientes com malária nos tempos 1, 7 e 14 após a entrada no Centro de Pesquisa em Medicina Tropical de Rondônia – CEPEM ou que tiveram alíquotas de sangue armazenadas no banco de amostra. Para isso, o DNA do parasita será extraído do sangue total fresco e seco em papel de filtro e utilizado em reações de qPCR que já foram padronizadas por outros centros, utilizando como iniciadores alvos moleculares ribossomais 18S e não ribossomais Pvr47 ( Plasmodium vivax ) e Pfr364 ( Plasmodium falciparum ). Os resultados iniciais desse projeto foram a reprodução da extração do DNA de 40 amostras pelo método do KIT da QIAGEN para sangue fresco de pacientes em nosso ambiente laboratorial, a quantificação do DNA extraído no NanoDrop e qPCR para alvos ribossomais. Para completar esse estudo serão analisadas mais 34 amostras, e após todas as etapas serem cumpridas, os resultados destas reações serão analisados quanto a diminuição da parasitemia e se há ou não a ocorrência de negatividade. Esses resultados também serão comparados ao diagnóstico de microscopia previamente realizado pelo CEPEM. |