PADRONIZAÇÃO DA TÉCNICA DE ELISA-IN HOUSE UTILIZANDO ANTÍGENOS TOTAIS SOLÚVEIS DE ISOLADOS DE Trypanosoma cruzi DO ESTADO AMAZONAS.
SUSAN SMITH DORIA 1, ADRIANO GOMES DA SILVA1, SABRINA S. BRITO1, ARINEIA SOARES DA SILVA1, LUCAS SILVA FERREIRA1, DEBORA R. TEIXEIRA DE SOUSA1, MARIA AUXILIADORA CRUZ MESSA CHIARION1, KATIA DO NASCIMENTO COUCEIRO1, JOÃO MARCUS BEMFICA BARBOSA FERREIRA1, JORGE AUGUSTO DE OLIVEIRA GUERRA 1, MARIA DAS GRAÇAS VALE BARBOSA GUERRA1
1. PPGMT-UEA - Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, Universidade do Estado do Amazonas, 2. FIOCRUZ - Fundação Oswaldo Cruz , 3. FMT-HVD - Fundação de Medicina Tropical do Amazonas. Dr Heitor Vieira Dourado, 4. HUFM - Hospital Universitário Francisca Mendes, 5. UFAM - Universidade Federal do Amazonas
susan.qbp@gmail.com

No diagnóstico da doença de Chagas crônica, recomenda-se provas sorológicas, mas as opções de testes, apresentam resultados discordantes entre os diferentes kits disponíveis no mercado, devido principalmente aos tipos de antígenos de Trypanosoma cruzi utilizados na preparação dos kits. Em regiões endêmicas, o uso de metodologias in house, usando isolados de T. cruzi autóctones, tem demostrado melhores resultados, quando comparados com o uso de kit comerciais. O objetivo deste estudo é padronizar uma técnica de ELISA in house usando antígenos de isolados de T. cruzi, autóctones do estado Amazonas para o diagnóstico da doença de Chagas. Os testes foram realizados no laboratório de entomologia da FMT-HVD, onde foram utilizados os extratos de antígenos, AM90-T2 e AM90-T5; nos antígenos foram testadas as concentrações de 40, 20, 10, 5 e 2.5 ug/mL, nos soros foram testadas diluições 1:50 e 1:100, usando como amostras positivas e negativas um pool de soros procedentes de pacientes que foram confirmados em diferentes testes  sorológicos no estado Amazonas. Para a titulação do conjugado anti – IgG humano (Invitrogen®), foram usadas as diluições de 1:500, 1:1000, 1:2000 e 1:4000. Foi dividida a mediana dos positivos pela mediana dos negativos para observar quantas vezes o resultado dos positivos é maior comparado com os resultados negativos. Observou-se que os resultados da diluição de 1:100 dos soros apresentam maior quociente que os resultados da diluição 1:50. Na concentração dos antígenos, quando a diluição dos soros estava em 1:50, a melhor concentração foi de 5 ug/mL e nos soros 1:100, foi na concentração de 10ug/mL, tendo a melhor concentração do conjugado de diluição 1:500. Na etapa seguinte serão realizados testes de ELISA in house para avaliar diferentes antígenos obtidos de isolados de Trypanosoma cruzi do estado Amazonas, bem como calcular a sensibilidade e especificidade dos testes e ainda verificar a possibilidade de usá-los para o diagnóstico da doença de Chagas no Amazonas.



Palavras-chaves:  Diagnóstico, Doença de Chagas, Sorologia