AVALIAÇÃO DA PCR EM TEMPO REAL COM INSUMOS NACIONAIS ATRAVÉS DO LIMITE DE DETECÇÃO DE DNA DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS PARA O DIAGNÓSTICO DA TUBERCULOSE PULMONAR E EXTRAPULMONAR |
Introdução: A tuberculose (TB) é uma enfermidade infectocontagiosa, causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis ( Mtb ), e permanece como umas das doenças infecciosas com maior taxa de mortalidade no Brasil e no mundo. O diagnóstico da TB possui algumas limitações relacionadas ao isolamento do patógeno e demora no crescimento das colônias, uma vez que algumas amostras decorrem de cepas paucibacilares. Entretanto, novas tecnologias para identificação da doença estão sendo otimizadas visando eficiência, rapidez e baixo custo, o que é fundamental para início do tratamento e, consequentemente, sucesso no controle da doença. Objetivo: Avaliar o limite de detecção da PCR em tempo real (qPCR) com insumos nacionais com DNA do Mtb para o diagnóstico da TB pulmonar e extrapulmonar. Desenho do estudo: O estudo está sendo desenvolvido no laboratório de Imunoepidemiologia/IAM/FIOCRUZ em parceria com os Serviços de Referência para Tuberculose do SUS/Pernambuco e o Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Trata-se de um estudo analítico para avaliação um novo teste diagnóstico. Metodologia: A análise do limite de detecção foi feita através de uma curva de diluição de DNA da cepa de referência H37Rv do Mtb , cuja concentração foi previamente dosada, variando de 10ng/µl a 100ag/µl. A diluição foi feita em água Milli Q e as amostras foram submetidas à qPCR, com as seguintes condições: 50º - 2min; 95º 10min; 95º 15seg e 60º 1min durante 45 ciclos. Resultados: Os resultados obtidos mostraram através da análise do valor do cycle threshold (Ct), um limite de detecção de 1fg/ µl. Discussões e conclusões: A qPCR mostrou uma ótima sensibilidade, muito superior à encontrada nos métodos convencionais de rotina (baciloscopia e cultura), e pode ser utilizada como ferramenta auxiliar no diagnóstico da TB, principalmente nos casos mais difíceis de serem elucidados, como os casos paucibacilares e/ou extrapulmonares. A partir dos resultados obtidos, a qPCR será testada em amostras biológicas de pacientes com TB. |